Первый метод относительно трудоемок и для наших собаководов пока малодоступен. Он состоит в том, что у суки берется проба крови и, после некоторых манипуляций, цвет пробы сравнивают с цветом контрольных растворов. Если цвет пробы менее интенсивен или равен нижнему пределу, это значит, что овуляция наступила. Если цвет находится между контрольными пробами, она наступит в ближайшие 48 часов. Этот метод достаточно точен и очень жаль, что у нас он не внедрен в практику.
Эффективным является также второй метод - метод вагинальных мазков, предложенный кандидатом наук Е.Е. Коваленко и ее коллегами, сотрудниками кафедры зоологии позвоночных Санкт-Петербургского Государственного Университета.
Этот метод хорошо известен в западных странах. Он основан на том, что слизистая оболочка половых путей изменяется в непосредственной связи с изменениями в яичниках в процессе развития и созревания половых клеток. Благодаря пробам, взятым из влагалища сук, можно пронаблюдать весь процесс протекания полового цикла.
Для получения проб ватным тампоном на палочке собирают слизь во влагалище и этот мазок переносят на предметное стекло. Пробы берут раз в сутки. В зависимости от того, хотим мы получить полную картину цикла или определить дни максимальной овуляции , берутся различные количества проб.
Для полного обследования и составления графика необходимы 20-25 проб, начиная с 3-5 дня пустовки. При наличии графика пробы берутся лишь выборочно - 5-8 или разово - 2-3 для уточнения сроков вязки.
Сотрудники кафедры акушерства, гинекологии и искусственного осеменения животных Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины В.У. Давыдов, Г.С. Степанов и Н.Б. Баженова усовершенствовали методику цитодиагностики в ветеринарной гинекологии. Они утверждают, что на протяжении всей жизни животного слизистая оболочка влагалища способна отражать колебания уровня эндогенных гормонов, равно как и введение в организм экзогенных гормонов. Ими разработано устройство для получения мазков-отпечатков со слизистой оболочки влагалища. Исследуемый материал берется из краниальной трети верхнего свода с помощью влагалищного зеркала. Место взятия определено в связи с тем, что именно эта часть влагалища является особенно чувствительной к гормональной стимуляции у млекопитающих. При взятии материала из нижнего свода влагалища, в мазки, как правило, попадают отторгнувшиеся значительно раньше клетки.
Предовуляционный период характеризуется появлением в мазках большого количества парабазальных и базальных клеток. Клетки поверхностных слоев немногочисленны, располагаются изолированно, их края расправлены с крупными ядрами.
После овуляции в мазке преобладают поверхностные клетки с пикнотическими ядрами. В этот период появляется «измятость» клеток и закрученность их краев, границы клеток нечеткие. В период охоты и после овуляции наблюдается появление в мазках секреторных клеток, количество их значительно увеличивается к середине цикла и вновь уменьшается в фазе проэструма.
В течение всего цикла в мазках выявлены нейтрофилы, количество которых значительно увеличивается после овуляции.
Идеально, если картина вагинальных мазков совпадет с анализом на гормональную активность. Это указывает на точное время овуляции и позволяет определить наилучшее время для спаривания.
Сама процедура получения влагалищного мазка несложна и доступна каждому владельцу собаки. Для того, чтобы получить препарат влагалищного мазка, необходимо иметь:
1. Дистиллированную воду 2-3 литра.
2. Несколько глазных пипеток с закругленными концами.
3. Предметные стекла (30 штук).
4. Чашки Петри или чашки Коха (можно обойтись и небольшими блюдцами).
5. «Салазки» – 2 стеклянные трубочки диаметром 3-4 мм, длиной 6-7 см, соединенные между собой с обоих концов резиновыми трубками, диаметром, позволяющим плотно надеть их на стеклянные трубки, длиной 4-6 см. Салазки кладутся на дно чашек Петри (или Коха) или блюдца. Салазки можно успешно заменить двумя спичками, уложенными на дно чашек или блюдца параллельно друг другу. На салазки или спички кладутся предметные стекла.
6. Фильтровальная бумага.
7. Стаканчик (высотой с длину предметного стекла) для споласкивания, окрашенного препарата.
8. Краситель.
a. Эозиновокислый метиленовый синий по Май-Грюнвальду или по Лейшману (готовый раствор).
b. Раствор Гимза (метиленовый синий и эозин).
Готовые растворы этих красителей бывают в лабораториях: медицинских или биологических, где красят мазки крови или влагалищные мазки.
9. Стеклянные сосуды (маленькие бюксики или стаканчики) для красителя и дистиллированной воды.
Техника получения и окраски мазков.
1. В чашке Петри (или Коха) или на дне блюдца, на «салазки» или на спички положить чисто вымытое и обезжиренное сухое предметное стекло.
2. В чистую пипетку набрать Ѕ ее объема дистиллированной воды.
3. Ввести пипетку во влагалище суки (по возможности не касаясь его наружного края), выпустить воду и сразу набрать жидкость из влагалища в пипетку («промыть» влагалище).
4. Содержимое пипетки сразу же нанести на середину приготовленного предметного стекла.
5. Высушить мазок на воздухе, прикрыв от пыли чашку Петри (или Коха) или блюдце фильтровальной бумагой.
6. Набрав в отдельную пипетку краситель, нанести 5-6 капель на высушенный мазок и оставить на 3-5 минут.
7. Нанести на мазок 5-6 капель дистиллированной воды так, чтобы мазок вода покрывала полностью, оставить еще на 5-10 минут, затем слить раствор и погрузить стекло с окрашенным мазком на очень короткий срок (до 1-1,5 мин.) в стаканчик, доверху наполненный дистиллированной водой.
Аккуратно обсушить между листками фильтровальной бумаги.
8. Маркировать мазок. На краю (любом, т.к. посередине располагается мазок) предметного стекла написать: № препарата, кличку собаки, дату и порядковый день пустовки. Надпись лучше выполнить тушью и залить клеем БФ.
Окраска удается лучше на совсем свежих мазках, но вполне допустима окраска мазков и 2-х – 4-х дневной давности.
Препарат готов, рассматривать его следует под микроскопом при 10-и – 40-а кратном увеличении.
На окрашенном препарате (по Май-Грюнвальду или Лейшману) «чешуйки» окрашены в красноватый цвет, цитоплазма эпителиальных клеток – в голубоватый цвет, а ядра – в синий. Лейкоциты окрашиваются в синий, почти фиолетовый цвет.
При окраске по Гимза: «чешуйки» темно-синего цвета, цитоплазма – голубая, ядра – синие. Лейкоциты – темно-синие.
Интенсивность окраски клеточных элементов может зависеть от свежести красителя.
Позволю себе коротко остановиться на отличиях цитологической картины на разных стадиях полового цикла.
Как уже говорилось выше, весь цикл составляет четыре стадии или фазы, из которых нас интересует лишь три – предтечка, течка и послетечка (проэструс, эструс и метаэструс), четвертая стадия – покой – составляет промежуток между двумя пустовками и характеризуется полной инактивностью половой системы.
1. Фаза предтечки, или подготовительная фаза длится от 9 до 11 дней и характеризуется кровянистыми выделениями, иногда обильными, в яичниках собаки в это время происходит интенсивное развитие фолликулов. Собака игрива, внимательно исследует все мочевые метки собак, постоянно присаживается, оставляя буквально капельки мочи, содержащие специфический запах, привлекающий кобелей. В крови быстро растет и достигает пика за 1-2 дня до конца проэструса концентрация эстрогена. Картина влагалищного мазка в начале фазы характеризуется большим числом округлой формы эпителиальных клеток с довольно крупными ядрами. В конце фазы (9-10 день от начала пустовки при нормальном половом цикле) – в мазке появляются отдельные ороговевшие безъядерные многоугольные клетки, так называемые «чешуйки».
2. Фаза собственно течки длится от 2 до 10 дней и характеризуется почти бесцветными или бледно розовыми выделениями из влагалища. В этой фазе происходит разрыв зрелых фолликулов и выбрасывание яйцеклеток, которые через несколько часов попадают в яйцеводы, где задерживаются до 7 – 8 дней; здесь же происходит встреча со сперматозоидами (в случае вязки) и оплодотворение. Наиболее высокой способностью к оплодотворению яйцеклетки обладают в первые 5-6 дней. В крови резко повышается уровень гормона эстрадиола, что приводит к увеличению количества во влагалище полностью ороговевших эпителиальных клеток – «чешуек». Оптимальным сроком для вязки следует считать тот день, когда на препарате влагалищного мазка подавляющее большинство клеточных элементов представлено чешуйками.
3. Фаза послетечки или торможения занимает в половом цикле около 10-14 дней и постепенно переходит в стадию полного генеративного покоя.
В этой фазе еще могут иметь место выделения из влагалища, они, как правило, бесцветны, но могут быть и бледнорозовыми, сука становится спокойной и агрессивной по отношению к кобелям. На месте лопнувших фолликулов образуются желтые тела, вырабатывающие гормон прогестерон, подавляющий овуляцию. Неоплодотворенные яйцеклетки разрушаются и погибают. Влагалищный мазок демонстрирует незначительное количество «чешуек» обилие молодых эпителиальных клеток, округлых с крупными ядрами. Хорошим показателем этой фазы служит нарастающее число лейкоцитов.
Таким образом, картина влагалищного мазка достаточно четко характеризует и отражает физиологическое состояние суки и ее готовность к спариванию. Она также позволяет оценить по ряду характеристик особенности репродуктивных циклов семейств, и возможность зачатия, выявить причины «ложной беременности», малой плодовитости и т.п.
Заслуженный эксперт России кандидат биологических наук
А.Э. Айрапетян
Третий метод основан на том факте, что во время овуляции слизь влагалища содержит глюкозу, что можно установить благодаря индикаторным лентам, которые используют диабетики. Полосочку этой ленты вводят во влагалище, где она смачивается в выделениях. В течение 1 минуты она становится зеленого цвета. В этом случае можно говорить о максимальной готовности суки в ближайшие 24 часа. У инфантильных сук концентрация секрета ниже, поэтому чувствительность индикаторной ленты может быть недостаточна.
Четвертый - визуальный метод. Наши разведенцы, которые не знакомы с вышеописанными методами, как правило, используют визуальный метод. Он самый доступный, но не самый надежный, поскольку характер выделений может неадекватно отражать состояние суки.
Рекомендуемый средний срок вязки для бордоских догов - 12-13 день течки, у некоторых сук и позже. С каждым последующим щенением дни овуляции могут сдвигаться в сторону возрастания. Например, если вы впервые повязали свою суку на 11 и 13 дни, в следующую вязку лучше это сделать на 12 и 14 дни, или даже на 13 и 15. Однако каждый владелец должен ориентироваться на поведение своей суки, поскольку собака сама хорошо чувствует свое физиологическое состояние. Обычно для определения готовности суки к вязке владелец кладет одну руку на круп стоящей суки, а пальцем другой руки дотрагивается до петли или чуть выше. Готовая сука начинает подергивать петлей кверху, задирать и отводить хвост, широко расставляя при этом задние ноги. Этот метод позволяет определить готовность суки к спариванию в ближайшие 48 часов.
Состояние петли суки закономерно изменяется на разных этапах течки. Она постепенно набухает до своих максимальных размеров, но при этом остается твердой на ощупь. Как только петля становится мягкой, вялой, а иногда повисает мешком - это означает, что наступила овуляция и сука готова к вязке.
Половой цикл кобеля
Для созревания сперматозоидов требуется несколько суток. Развитие новой партии начинается в случае расхода предыдущей. Отсюда следует, что половой цикл кобеля зависит от регулярности спаривания.
Важно знать, что за одно спаривание кобель не расходует весь запас сперматозоидов даже из одного семенника и может успешно, с интервалом в несколько часов, оплодотворить несколько самок. Время в этом случае нужно лишь для восстановления полового возбуждения. Какое количество спариваний может произвести кобель, зависит от его индивидуальных особенностей, а именно возраста, количества клеток в половых железах, количество извергаемых клеток при каждом оплодотворении. Теоретически половые железы кобеля могут работать непрерывно по мере расхода семени при условии, что в интервалах между спариванием запас сперматозоидов успевает восстанавливаться.
На практике процессы созревания сперматозоидов, формирование и выведение семени и само спаривание являются большой нагрузкой для кобеля, требуют энергетических и нервных затрат.
Поэтому длительное интенсивное использование кобеля истощает его нервную систему, отрицательно сказывается на здоровье, приводит к потере интереса к спариванию, преждевременному старению и одряхлению кобеля.
. Факторы, влияющие на эффективное воспроизводство собак.
Сезон осеменения.
По данным некоторых авторов, (С. Гьерра, С. Пети, Р. Бадино) снижение плодовитости возникает, когда вязки или искусственное осеменение проводятся к концу летнего периода, что совпадает со снижением качества спермы у производителей. Но данные исследования не могут нести большую долю вероятности, так как сезонное снижение продуктивности наблюдается не всегда именно в это время года и зависит от множества факторов. Во всяком случае, было бы предпочтительно избегать данного периода и осуществлять репродукцию животных со слабой вероятностью оплодотворения зимой, чтобы увеличить шанс на успех.
